酵母双杂交

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酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域：DNA结合功能域和转录激活结构域，前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游，后者同转录复合体的其他成分作用，启动相应基因的转录。将编码DNA结合功能域的基因与已知诱饵蛋白质基因构建在同一个表达载体上，在酵母中表达两者的融合蛋白，将编码DNA转录激活域的基因和cDNA文库的基因构建在AD—LIBRARY表达载体上，同时将上述两种载体转化改造后的酵母。当两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD—LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。在传统的酵母双杂交系统中，蛋白之间的相互作用是在细胞核内发生的。然而许多待研究的蛋白质是膜蛋白,它们需定位到膜上之后才能表现正常的生物功能，因此根据需要又发展了新的双杂交系统，例如Sos蛋白介导的双杂交系统,也被称为Sos恢复系统(Sos recruitment system)，来弥补传统系统的缺陷。