凝胶迁移实验(EMSA)
服务简介:EMSA是检测蛋白与DNA形成复合体并直接相互作用的技术方法,可用于定性和定量分析,能够更准确的判断蛋白与DNA的特异性结合序列,因此蛋白-DNA复合体的识别在研究基因的表达调控中具有重要作用。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和生物素标记的DNA或RNA探针共孵育,在非变性聚丙酰胺烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-蛋白复合物或RNA-蛋白复合物比非结合的探针移动得慢。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用细胞核或细胞浆抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
服务流程:
(1)样本选择:客户寄送处理好的细胞或蛋白裂解液;
(2)EMSA实验
A. 样本数(泳道)设定及浓度梯度实验设计
B. 3'生物素探针设计及合成
C. EMSA电泳凝胶配置
D. 电泳分离复合物和非结合的探针
E. 紫外交联
F. EMSA反应物电泳检测
说明:
(1)服务周期:20-30工作日
(2)细胞核蛋白提取物或纯化的转录因子,部分实验亦可使用重组表达的蛋白,每张膜至少提供50μL,浓度>0.5mg/mL
(3)客户提供探针或其序列,如需设计,请客户提供待检测目的基因序列等准确信息或DNA结合蛋白相关信息或相关文献
费用标准:询价
交付结果:
(1)实验原始数据及结果分析
(2)详细实验报告(含所需试剂耗材、仪器设备、操作过程)
(3)剩余的目的蛋白、抗体、实验合成的生物素标记探针
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联系方式
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