乙酰化相关检测	HAT（组蛋白乙酰转移酶）活性检测实验
	染色质免疫沉淀检测基因组特定区域染色质中组蛋白乙酰化状态
	免疫共沉淀/Western blot 检测细胞/组织组蛋白乙酰化水平

HAT（组蛋白乙酰转移酶）活性检测实验

组蛋白是与基因组DNA共同构成染色质的基本物质，染色体DNA双螺旋分子一组蛋白为骨架，缠绕结合构成染色质。染色质缠绕进门程度的改变，是相关基因表达开放与关闭的调节机制之一。组蛋白乙酰化水平的调控是这种调节机制的一个基础。组蛋白乙酰化水平由组蛋白乙酰转移酶(Histone Acetyltransferase, HAT)和组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase, HDAC)共同决定并维持其动态平衡，从而控制染色质的结构和调节基因的表达。研究表明肿瘤的发病与组蛋白的乙酰化和去乙酰化这对平衡的紊乱有着密切关系。HATs把乙酰辅酶A的乙酰基转移到组蛋白N端的特定赖氨酸残基上，中和它所带的负电荷，增加其疏水性，降低组蛋白与DNA的亲和性，使RNA合成酶、转录因子、调节因子复合物接近DNA，使基因更容易表达。HAT活性异常可以导致从神经性病变到癌症等多种疾病的产生。

服务流程:

（1）细胞核抽提物/HAT抽提物制备

（2）分光光度法/荧光法/试剂盒(选一)检测HAT活性

（3）绘制拟合率曲线(抑制率/活性)

说明：

（1）服务周期：10-15工作日

（2）如需检测纯化蛋白：需-20℃条件下保存和运输，浓度要求：>1μg/μL

（3）如需分离组织中HAT，将另外收取组织抽提费用

（4）如选择试剂盒检测，请提供相关试剂盒

费用标准：询价

交付结果：

（1）原始数据及相关结果分析

（2）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测基因组特定区域染色质中组蛋白的乙酰化状态

染色质免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation, ChIP）是研究活体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具，最初用以研究组蛋白乙酰化与特异DNA序列的关系及其对基因转录活性的影响，与实时荧光定量PCR技术结合，可有效检测目的基因的组蛋白修饰水平。

服务流程：

（1）用1％的甲醛将核小体与DNA轻微交联

（2）分离染色质，并用超声仪处理切割到平均3个核小体长度

（3）用抗乙酰化N―末端组蛋白序列的特异抗体进行免疫沉淀

（4）逆转交联，抽提免疫沉淀染色质中的DNA

（5）PCR扩增特定的DNA序列，从而检测特定基因相关染色质中组蛋白乙酰化的程度

说明：

（1）服务周期：30-40工作日

（2）请提供待检测组蛋白乙酰化位点，相应ChIP级抗体（或委托我公司代购）

（3）请提供研究用细胞或组织，或者实验方案

费用标准：询价

交付结果：

（1）原始实验结果及相关结果分析

（2）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

免疫沉淀/Western blot 检测细胞/组织组蛋白乙酰化水平

免疫沉淀（Immunoprecitation, IP）是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。

服务流程：

（1）IP级抗乙酰赖氨酸抗体免疫沉淀细胞总乙酰化蛋白

（2）H3, H4抗体Western blot检测细胞总乙酰蛋白中组蛋白的含量

（3）直接用特定乙酰化位点-特异性抗体如组蛋白赖氨酸乙酰化抗体检测细胞组蛋白乙酰化水平

说明：

(1) 服务周期：15-20工作日

(2) 客户需提供研究用细胞或组织，或者实验方案

(3) 客户需提供各种指标检测相应抗体（或委托我公司代购）

费用标准：询价

交付结果：

(1) 原始数据及相关结果分析

(2）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

甲基化相关检测

服务简介：蛋白质甲基化是翻译后修饰的一种形式，发生在H3、H4的赖氨酸或精氨酸残基上，可能与基因抑制有关，也可能与基因的激活相关，这往往取决于被修饰的位置和程度。精氨酸可以被甲基化一次(称为一甲基精氨酸)或两次(精氨酸甲基转移酶PRMTs将两个甲基同时转移到精氨酸多肽末端的同一个氮原子上成为非对称性甲基精氨酸，或者在每个氮端各加一个甲基成为对称性二甲基精氨酸)。赖氨酸经赖氨酸转移酶的催化可以甲基化一次、两次或三次。组蛋白甲基化是被研究最多的一类。在组蛋白转移酶的催化下，S-腺苷甲硫氨酸的甲基转移到组蛋白，从而抑制或激活基因的表达。甲基化检测主要有细胞或组织组蛋白甲基化水平检测，甲基化转移酶/去甲基化酶检测。

服务流程：

（1）IP级抗甲基化精氨酸/赖氨酸抗体免疫沉淀细胞总甲基化蛋白

（2）H3, H4甲基化抗体Western blot检测细胞甲基化组蛋白的含量

（3）直接用特定甲基化位点-特异性抗体，如H3-K4me3， H3-K9me3， H3-K27me3检测细胞组蛋白甲基化水平。

说明：

（1）服务周期：10-15工作日

（2）客户需提供研究用细胞，如为组织另收取蛋白提取费用，或者实验方案

（3）客户需提供各种指标检测相应抗体（或委托我公司代购）

费用标准：询价

交付结果：

（1）原始数据及相关结果分析

（2）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

磷酸化相关检测

服务简介：在有机体内，磷酸化是蛋白翻译后修饰中最为广泛的共价修饰形式，同时也是原核生物和真核生物中最重要的调控修饰形式。磷酸化对蛋白质功能的正常发挥起着重要的调节作用，该过程是由蛋白质激酶（Kinase）催化的把ATP或GTP的γ位磷酸基转移到底物蛋白质的氨基酸残基，如丝氨酸（Serine，Ser，S）、苏氨酸（Threonine，Thr，T）和酪氨酸（Tyrosine，Tyr，Y）等上的过程，而其逆向过程则是由蛋白质磷酸酶去除相应的磷酸基团。正是这两种酶的相反作用及其中所涉及到的能量消耗与生成使磷酸化成为体内很多生理活动调控的方式。

本公司提供磷酸化检测方法主要分为以下5种：

激酶活性分析：

生物学样品中的激酶活性通常是在体外测定的，在ATP的存在下将免疫沉淀的激酶与外源底物共同孵育。之后通过一些报告系统来评估特定激酶对底物的磷酸化，包括显色、放射性或荧光检测。

Western blot：

是评估蛋白磷酸化状态的最常用方法，许多磷酸化特异抗体十分灵敏，可轻松检测常规样品（如10-30µg细胞提取物）中的磷酸化蛋白。由于测得的磷酸化蛋白水平可能随处理或凝胶上样误差而变化，研究人员常常利用一个抗体来检测同源蛋白的总水平（而不考虑磷酸化状态），以确定磷酸化组分相对于总组分的比例，并充当上样内对照。

酶联免疫吸附分析(ELISA)：

已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法。磷酸化特异的ELISA技术具有一些优点：1.利用经过校准的标准品，定量结果更准确。2.特异性更高。3.灵敏度更高，可以检测低丰度的蛋白。4.高通量检测.

细胞内流式细胞术和ICC/IHC：

流式细胞仪利用激光来激发用于抗体检测的荧光染料。通过细胞表面标志的分型可检测异质群体中特定细胞类型的蛋白，通过这种方法可分析稀有的细胞群体，而不用担心细胞损失或细胞分选过程中可能发生的蛋白表达变化。ICC通常指的是利用显微镜对培养细胞中的蛋白进行检测，通常是确定细胞内定位的方法；而IHC指的是对完整组织切片中的蛋白进行检测。

质谱：

复杂的生物样品（如细胞裂解液）中蛋白质磷酸化的全面评估（磷酸化蛋白质组学），包括磷酸化蛋白和磷酸化肽段的鉴定，以及磷酸化残基的测序。

说明：

（1）服务周期：10-20工作日

（2）客户需提供符合要求的细胞或组织样品，或者提供实验方案

（3）客户需提供质量保证的一抗/试剂盒（或委托我公司代购）

费用标准：询价

交付结果：

（1）原始数据及相关结果分析

（2）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

泛素化相关检测