Northern blot印迹杂交一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者病理环境下特定基因表达情况。，RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，随后凝胶上的RNA分子被转移到膜上。膜一般都带有正电荷，核酸分子由于带负电荷可以与膜很好的结合。RNA分子被转移到膜上后须经过烘烤或者紫外交联的方法加以固定。再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。杂交过后，可采用X胶片显色的方法来检测信号。Norther blot中的探针序列需要和检测目的基因序列互补配对，探针可以是DNA、RNA或者其它的寡聚核苷酸，体外合成的RNA探针可以采用更高的退火温度来减少背景中的噪音。探针一般采用生物素或者地高辛来进行标记。

服务流程:

（1）待测RNA制备

（2）探针制备

（3）琼脂糖凝胶电泳分离待测RNA样品

（4）凝胶预处理

（5）转膜

（6）紫外交联

（7）预杂交

（8）杂交

（9）洗膜

（10）放射性自显影检测

（11）实验结果分析及报告

说明：

（1）服务周期：20-30工作日

（2）待检测目的基因序列和探针序列(（如自带探针，请提供探针浓度：100µmol/µL，>10µL,冰袋运输，RNA探针干冰运输)，及尽可能详细的背景资料

（3）RNA质量对实验结果影响巨大，请提供高质量的RNA样品，建议采用进口试剂盒提取RNA，及分光光度计检测纯度结果，确保RNA浓度不低于0.5µg/µL，杂交需模板RNA约20µg/道/次，请提供足量(两次实验)的RNA样品。

（4）请干冰运输样本RNA，避免反复冻融

费用标准：询价

交付结果：

（1）RNA样品检测报告（检测后样品不返还）

（2）Northern blot实验结果检测报告

（3）原始实验图片及原始数据

（5）具体试验流程(包括实验步骤、主要仪器及试剂说明等)

circRNA

一、荧光定量PCR检测

cirRNA的反转录需用随机引物（pd(N)6 和pd(N)9 都可以）进行反转录，一定不能用oligdT引物反转录,因为circRNA没有3’polyA尾，其次就是PCR的引物设计，circRNA的引物（Divergent PCR ）与线性mRNA的引物（convergent PCR）设计方向刚好是相反的。

服务流程:

（1）样品RNA抽提

（2）RNA质检(用于circRNA的定量研究的RNA严格来讲是需要三无的，既无基因组DNA，无核糖体RNA，无线性RNA)

（3）RNA逆转录cDNA

（4）cirRNA特殊引物设计

（5）cirRNA PCR扩增

（6）PCR结果分析

二、Northern Blot检测-DIG探针标记

Northern Blotting是检测circRNA的金标准，探针通常跨反向剪接位点设计。但由于Northern Blotting需要的circRNA量非常大，耗时间精力。常用的检测方案还是用RT-qPCR。

LncRNA

一、荧光定量PCR检测

通过荧光定量PCR，可简单可靠地分析lncRNA在组织/细胞中表达量的变化。这种基于qPCR的lncRNA检测方法操作起来简单方便，可广泛应用于癌症，干细胞，免疫，生物标志物的发现和验证以及各种细胞表型的分析和研究。LncRNA的qPCR引物设计最主要的三个原则：跨外显子设计，特异性比对，引物位置。