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BCA法蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)

产品编号:

NCTP18902

品牌:

NCT

规格:

¥1450/2500T ¥328/500T ¥158/200T

说明书:

产品介绍


  在碱性条件下,基于双缩脲反应,待测蛋白可将Cu2+还原为Cu+,Cu+进一步与BCA试剂反应,产生一种紫蓝色复合物。在波长为562nm处检测其吸收值,同时与标准曲线比对,即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定因其简便、快速、灵敏及稳定性,目前已被科研人员广泛应用于蛋白质浓度测定。本试剂盒适用于蛋白质浓度的测定。标准曲线的线性范围为0.02-2.0mg/mL。

产品组成


规格\试剂名称

A试剂

B试剂

Cu试剂

PBS稀释液

BSA蛋白标准液

200T

10mL

10mL

0.4mL

3mL

0.1mL

500T

25mL

25mL

1mL

7.5mL

0.25mL

2500T

125mL

125mL

5mL

37.5mL

1.25mL

储存条件

室温

室温

室温

室温

-20℃

产品用法


一. 酶标仪法  

1. 配制工作液:将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂(两者充分混匀),将C试剂与A试剂按照1:1体积配制成工作液,充分混匀后放置室温备用(建议工作液室温放置不超过24小时)。

2. 分别将蛋白标准品0, 1, 2, 4, 6, 8, 10μL加入EP管中,分别用PBS补足至100μL体积。混匀后分别加入96孔板中(每个测定做3个平行)。

3. 稀释样品:取数个梯度稀释后的蛋白样品,使得终体积为100μL。将蛋白样品分别加入96孔板中。尽量让样品点落在标准线1/2后,以便尽可能减少误差。样品稀释

4. 检测样品蛋白浓度:每孔加入100μL配制好的BCA工作液,混匀后60℃温育60min,冷却至室温,酶标仪测定A562nm吸光度,制作标准曲线,从曲线中求出样品浓度。


二. 分光光度计法 

1. 配制工作液:将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂(两者充分混匀),将C试剂与A试剂按照1:1体积配制成工作液,充分混匀后放置室温备用(工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做3个平行。建议工作液室温放置不超过24小时)。

2. 稀释标准品:将BSA标准品用PBS 10倍稀释。分别将稀释后的标准品0, 2.5, 62.5, 125, 187.5,250μL加入EP管中,分别用PBS补足至250μL体积。标准曲线一般5-6个点即可。

3. 稀释样品:取数个梯度稀释后的蛋白样品,使得终体积为250μL。将蛋白样品分别加入EP管中。尽量让样品点落在标准线1/2后,以便尽可能减少误差。

4. 检测样品蛋白浓度:每孔加入250μL配制好的BCA工作液,60℃温育60min,冷却至室温后分光光度计测定A562nm吸光度。绘制标准曲线,通过标准曲线计算样品的浓度。注意:实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

注意事项


1. 在检测过程请保持温度与时间恒定,以确保检测稳定性

2. BCA试剂如出现结晶沉淀,37℃温育至完全溶解后再使用,如发现细菌污染则应丢弃

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

4. 本试剂仅作科研用途

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